POD酶提取液（pod酶测出来的数据离谱）
求助:pod酶的测定
1、POD酶活性测定方法有定时法、连续监测法、平衡法。定时法 通过测定酶反应开始后某一时间段内（t1到t2）产物或底物浓度的总变化量来求取酶反应初速度的方法。其中t1往往取反应开始的时间。该法最基本的一点是停止反应后才测定底物或物的变化。优点：简单易行，对试剂要求不高。
2、待测样品中不能含有酶抑制剂，同时需避免反复冻融。 Pod酶液提取时，注意低温操作，防止酶活性。 以煮沸的酶液为对照时，酶要充分失活。 POD氧化剂具有一定腐蚀性，请小心操作。 POD氧化剂易挥发，请密闭保存，否则检测效率下降。
3、POD测定：酶液稀释10倍，取50uL待测液与2mL POD反应液和1mL 0.2mo1/L的磷酸二氢钾溶液反应，用紫外分光光度计于470nm处每隔30sec测其吸光值A470，重复3次求平均值，以△A470/min/gFW表示酶活大小。SOD（超氧化物歧化酶活性）的测定 试剂：① 0.05mol/l磷酸缓冲液（PH值为8）。
测sod与pod可以放在4度冰箱里处理一段时间吗
酶提取液的话，在4度冰箱里估计也存不到24小时；药品的话，最好零下18度保存，做试验拿出来用的时候也需要放到冰块里，用完马上放回去。
一般而言 越快越好 此外要低温（0度左右，不结冰为宜）可以延长酶活。
直接法 原理是根据O2 或产生O2 的物质本身的性质测定O2 的歧化量，从而确定SOD的活性。经典的直接法包括：脉冲辐射分解法、电子顺磁共振波法（EPR）、核磁共振法。由于所需的仪器设备价格昂贵，一般较少应用。
B. POD溶液制备：在50mL 100mmol/L pH0的磷酸盐缓冲液中加入19uL愈创木酚，加热搅拌，溶解冷却后加入28uL 30%的H2O2即为POD反应液，放到冰箱保存。
不是说一定十分钟过后就会变成蓝色。第二个问题离心机的转速不同应该是对实验的结果产生影响的，知网里面应该有转速对实验的影响方面的论文，建议你看一下。第三个问题数据应该是不正常的（针对SOD值来说）第四个问题使用有机溶剂清洗之后再用RO水冲洗晾干应该就行了，不会影响实验结果。
在研究生物抗氧化性时，测定抗氧化酶的活性是一个关键步骤。其中，SOD（超氧化物歧化酶）、POD（过氧化物酶）、CAT（过氧化氢酶）、APX（抗坏血酸过氧化物酶）的活性尤为重要，因为它们在生物体内的抗氧化反应中扮演着核心角色，通常会有显著的变化。
在测定pod活性的时候,要求反应时间内吸光度的变化,为什么
测定过氧化物酶活性使用愈创木酚法，原理是在酶的催化下，H2O2aq与愈创木酚反应生成茶褐色产物。此产物在470nm波长下具有最大吸收值，通过紫外分光光度计测定吸光度，反推酶活性。实验每分钟读一次吸光度，因为酶促反应持续进行，产物生成导致吸光度变化。
过氧化物酶（POD）活性的测定过氧化物酶是植物体内普遍存在的、活性较高的一种酶，它与呼吸作用、光合作用及生长素的氧化等都有密切关系，因此pod测定吸光值减小。
过氧化物酶催化H2O2氧化酚类物质，产生有色化合物。在愈创木酚法中，POD催化H2O2将愈创木酚氧化为红棕色的4-邻甲氧基苯酚，其470 nm处有高光吸收，因此可利用比色法测量其活性。实验所需材料包括各种果蔬，以及研磨设备、离心机、分光光度计等仪器，以及醋酸缓冲液、愈创木酚、H2O2等试剂。
pod酶活性测定方法有定时法、连续监测法、平衡法。定时法 通过测定酶反应开始后某一时间段内（t1到t2）产物或底物浓度的总变化量来求取酶反应初速度的方法。其中t1往往取反应开始的时间。该法最基本的一点是停止反应后才测定底物或物的变化。优点：简单易行，对试剂要求不高。
以1分钟内398nm吸光度上升0.01为一个酶活性单位，结果以U/mg蛋白或U/g鲜重表示。过氧化物酶（Peroxidase，POD）活性测定POD活性测定采用愈创木酚法（Lurie等，1997）。用酶标仪进行测定时按比例调整为总反应体积为400μL。
含2％的聚乙烯吡咯烷酮），研磨，4℃ 8000 r/min离心20 min，上清液定容至5 ml。 POD活性测定按Kraus和Fletcher（1994）方法进行3 ml反应混合液中含0.2％愈创木酚0.95 ml，50 mmol L-1 PBS（pH0）1 ml，酶液0.05 ml，0.3％过氧化氢1 ml。记录1 min内470 nm下的光吸收值变化。
果蔬中过氧化物酶活性的测定
1、实验所需材料包括各种果蔬，以及研磨设备、离心机、分光光度计等仪器，以及醋酸缓冲液、愈创木酚、H2O2等试剂。具体制备过程中，需先制备酶液，通过研磨果蔬并离心提取酶提取液，然后进行活性测定，通过在特定波长下测定吸光度变化，计算出每分钟吸光度变化值，以此确定过氧化物酶的活性。
2、在测定过氧化氢酶活力时，我们通常会测量反应溶液在特定波长下的吸光度值。随着过氧化氢酶的活性增加，反应溶液的吸光度会随时间而降低。根据吸光度的变化，可以计算出过氧化氢酶的活性单位，通常以每克鲜重（FW）果蔬样品每分钟吸光度变化值增加1时为1个过氧化物酶活性单位（U）。
3、保持果蔬原有的色、香、味。测定过氧化氢酶活力对果蔬加工可以保持食品原有色、香、味，过氧化氢酶还可防止果蔬冷冻保藏时的发酵变质以达到保鲜效果。过氧化氢酶是催化过氧化氢分解成氧和水的酶，存在于细胞的过氧化物酶体内。
4、检验酶的活性。烫漂时间一般以过氧化氢酶和过氧化物酶恰好失活为标准来确定烫漂的时间。
pod酶活性测定方法
1、pod酶活性测定方法有定时法、连续监测法、平衡法。定时法 通过测定酶反应开始后某一时间段内（t1到t2）产物或底物浓度的总变化量来求取酶反应初速度的方法。其中t1往往取反应开始的时间。该法最基本的一点是停止反应后才测定底物或物的变化。优点：简单易行，对试剂要求不高。
2、pod活性是测得出来的。pod，即过氧化物酶，它的活性测定方法是：称取1g鲜样，加0.1mol/LTris-HCl磷酸缓冲液，1300g、4℃下离心20min，采用分光光度法测定上清液中的酶活性。
3、植物体内过氧化物酶（POD）活性的测定通常采用光度法或荧光法。光度法：将植物组织或提取物加入含有过氧化氢和双甲基苯酚的反应液中，过氧化物酶催化过氧化氢分解产生的游离基与双甲基苯酚发生氧化反应，生成苯醌衍生物，产生黄色或棕色的化合物。可以通过测定反应液的吸光度或比色板的读数来测定POD活性。
4、POD过氧化物酶活性（参考Chance等[11]的方法）A. 酶液制备0.25g芽（剥除鳞片），加入0.0lg PVP， 5mL 0.lmol/L磷酸盐缓冲液（pH8，含有0.2mmo1/L EDTA， 0.4mmo1/L β-巯基乙醇）冰浴研磨，低温（4℃）.12000r/min离心10min后，所得上清液为待测液。
植物组织pod活性的测定注意事项
待测样品中不能含有酶抑制剂，同时需避免反复冻融。 POD酶液提取时，注意低温操作，防止酶活性。 以煮沸的酶液为对照时，酶要充分失活。 POD氧化剂具有一定腐蚀性，请小心操作。 POD氧化剂易挥发，请密闭保存，否则检测效率下降。
植物体内过氧化物酶（POD）活性的测定通常采用光度法或荧光法。光度法：将植物组织或提取物加入含有过氧化氢和双甲基苯酚的反应液中，过氧化物酶催化过氧化氢分解产生的游离基与双甲基苯酚发生氧化反应，生成苯醌衍生物，产生黄色或棕色的化合物。可以通过测定反应液的吸光度或比色板的读数来测定POD活性。
植物POD活性的正常范围是440.327~52463U/g。这个范围是通过对大量植物样品的测量得出的平均值和标准差。POD活性的单位是U/g，表示每克植物组织中的过氧化物酶活性。POD活性的测量通过酶学方法进行，常用的是测定POD催化反应产生的染色产物的吸光度变化。这种测量方法可以反映出植物体内POD的活性水平。
在植物生长发育的不同阶段，过氧化物酶的活性会呈现出动态变化。通常情况下，老化组织中过氧化物酶的活性相对较高，而幼嫩组织中的活性则较弱。这是因为过氧化物酶能够促使组织中的特定碳水化合物转化成木质素，进而增加组织的木质化程度。
活性氧包括超氧阴离子（O2-）、羟基自由基（OH·）、过氧阴离子（ROO·）、烷氧自由基（RO·）、过氧化氢（H2O2）和单线态氧（O21*）等。植物通过酶促和非酶促防御系统对抗活性氧的积累。
